免疫组化染色步骤

    试剂盒将多个抗鼠盒抗兔的IgG分子与辣根 过氧化物酶聚和，所形成的聚合物直接与一抗结合，从而放大了抗原抗体结合的信号。

其染色步骤如下：

1.石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS(PH7.4)冲洗三次，每次三分钟。

2.根据每一种抗体的要求，对组织抗原进行相应的恢复。

3.如有必要，每张切片加1滴或50ul3%过氧化氢溶液，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶。4.PBS冲洗3x3。

5.甩去PBS液，每张切片加1滴或50ul的第一抗体（用户自选），室温下孵育60分钟或4C过夜，建议参阅每种抗体的说明书。

6. PBS冲洗3x5。

7.甩去PBS液，每张切片加1滴或50ul聚合物增强剂（试剂A）室温下孵育20分钟。

8. PBS冲洗3x3

9.甩去PBS液

10. PBS冲洗3x3分钟

11.甩去PBS液，每张切片加2滴或100ul新鲜配制的DAB AEC显色液，显微镜下观察3-10分钟，阳性显色为棕色或红色。

12. 蒸馏水或自来水冲洗，苏木素复染，0。1%盐酸分化，自来水冲洗，冲洗返蓝。 PBS冲洗返蓝。

13.如果用DAB显色，则切片经过梯度酒精脱水干燥，（二甲苯透明）中性树胶封片；如果用AEC显色，则切片不能经酒精脱水，而直接用水性封片剂封片。